《表2 重组野生型和突变体ScTreS的相对酶活》

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《天蓝色链霉菌海藻糖合酶的异源表达、活性分析及重组菌全细胞转化合成海藻糖的条件优化》

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按1.2.4的方法将取得的重组菌和突变体粗酶液用Ni-NTA琼脂糖凝胶柱纯化。取少量粗酶液和纯化产物进行SDS-PAGE分析，如图1B和图3所示，含有重组质粒pET28a-TreS的大肠杆菌在分子量62 kDa处有明显蛋白表达带，所得纯化酶液单一，可见TreS在E.coli BL21（DE3）中能够正常表达。野生酶与突变酶酶活结果如表2所示，突变酶K246A与野生酶比酶活提高1.43倍；A165T和F178Y提高约1.39倍和1.18倍。已报道如谷氨酸棒杆菌Corynebacterium glutamicum、天蓝色链霉菌Streptomyces coelicolor（Gene ID:8250619）、阿维链霉菌Streptomyces avermitilis、灰色链霉菌Streptomyces griseus、弯曲热单孢菌Thermomonospora curvate来源的Tre S酶活分别为55、56、57、60和65 U/mg[26]。可见野生型Sc Tre S酶活略偏低，而A165T和K246A的酶活则基本相持平或更高。另外以100 g/L的海藻糖为底物，在相同条件下反应测得Sc Tre S逆向酶活为20.9 U/mg。