《表3 对ITS和psbA-trn H PCR扩增时不同退火温度与DNA模板用量的组合处理》

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《枣属ITS及psbA-trnH序列PCR反应体系的优化与验证》

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以毛果枣、蜀枣和褐果枣3个试材的总DNA为样品。参考其他树种和作物的扩增体系，确定总反应体积为50μL，内含dNTP 0.2 mmol/L、Mg2+2 mmol/L、双引物各60 ng、TaqDNA聚合酶1.5 U和不同的叶片总DNA模板量（设50、100、200 ng共3个处理），之后用重蒸水补足。PCR扩增反应程序为:（1）94℃预变性2 min；（2）94℃变性1 min，退火温度分别设57、55、52和48℃（即4个退火温度处理），退火1 min，72℃延伸1 min。循环35次；（3）保持72℃10 min。不同的退火温度及不同的DNA模板量组合共设12个处理（表3）。