《表2 4种不同试剂对不同浓度的DNA模板扩增的Ct值》

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《4种实时荧光PCR试剂在大米转基因检测中的应用比较》

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将模板DNA原液（浓度为50 ng/μL）按10倍浓度梯度进行稀释，扩增Ct值结果见表2。在模板浓度最高为50 ng/μL的情况下，Ti的Ct值最低，为23.36，反应速度最快；随后是Bi，Ct值为25.27；Pr和Ta的Ct值分别为27.76和27.35，无明显差异。当模板浓度为5 ng/μL时Ti的Ct值最小，为25.61；Pr的Ct值最大，为30.70；Bi和Ta的Ct值较近，分别为28.57和29.27。当模板浓度为5×10-1 ng/μL时，Ct值最低的是Ti，为29.68。当模板浓度为5×10-2ng/μL时，Ct值最低的是Bi，为32.94。当模板浓度最低，即5 pg/μL的情况下，不同试剂之间的扩增结果差别较大：Pr的Ct值最大，为42.26，且荧光值非常低；Ta的Ct值为37.85，Ct值有所提前，荧光值相对较高，但未形成典型的S型扩增曲线，扩增效率相对较低；Ta和Bi形成了荧光扩增曲线，但相比于Ti的Ct值36.25，Bi的Ct值35.45最小，比Ta的Ct值小约一个循环数，而且荧光值更高，在模板浓度最低的情况下为扩增效率最高的一个试剂。综合以上结果可以看出，模板浓度较高的情况下，Ti试剂的扩增灵敏度较高，Ct值相对较小。但在模板浓度低的情况下，Bi试剂的表现更好，Ct值相对较小，灵敏度高，扩增效率高。在理想条件下，当模板浓度以10倍梯度稀释时，实时荧光PCR扩增结果的Ct值以3.3个循环数依次增加，4种试剂中最接近该数值的是Bi试剂，每个梯度之间的Ct值差趋近于3.3，稳定性最好。