《表1 Militarine的酶促反应动力学参数》

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《白及有效成分Militarine在肝微粒体中的体外代谢途径及其酶促动力学特征》

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为考察Militarine的酶促反应是否依赖于NADPH，故分为NADPH组和NADPH阴性组进行考察。参照“2.3.3（1）”项下体外孵育条件操作，配制含不同浓度Militarine的孵育体系（终浓度分别为0.005、0.01、0.25、0.5、0.1、0.25、0.5、0.75、1、5、10nmol/mL，并确保反应体系中甲醇的体积分数≤1%），除加入或不加入NADPH外，其他条件相同，孵育60 min后终止反应。其中NADPH组的反应以加入NADPH时开始计时，NADPH阴性组（加入等体积PBS代替NADPH溶液）的反应以加入Militarine时开始计时。反应完毕后将反应液涡混3 min，在4℃下15 000 r/min离心5 min，取上清液，按照“2.4.1”“2.4.2”项下色谱、质谱条件测定。以Militarine的浓度（S）为横坐标、Militarine的清除速率（v）为纵坐标绘制酶促反应动力学曲线。根据米氏方程v=vmax×S/（km+S），采用规划求解的方法计算最大清除速率（vmax）、米氏常数（km）和固有清除率（CLint，计算公式为:CLint=vmax/km）。Militarine的酶促反应动力学参数结果见表1，NADPH组和NADPH阴性组Militarine酶促反应动力学曲线分别见图5、图6。经SPSS 24统计学软件处理，采用t检验，结果显示，Militarine在有/无NADPH参与的反应条件下，其CLint差异无统计学意义（P>0.05），表明其体外代谢不依赖于由NADPH启动的细胞色素P450（CYP）酶代谢途径，推测可能是经由肝微粒体中其他水解酶代谢。