《表2 荧光定量四环素类抗性基因引物序列》

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《保育和育肥猪舍气溶胶微生物组成和四环素类抗性基因丰度研究》

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土霉素等四环素类抗生素在养猪生产中广泛使用，因而本研究参照Hong等[8]的方法测定猪舍气溶胶中四环素类抗性基因TetB、TetH、TetZ、TetO、TetQ和TetW的绝对丰度。本试验构建了这些抗性基因的标准质粒DNA，并以重组质粒为标准品采用10倍稀释梯度（108拷贝数到100拷贝数）建立每个抗性基因的标准曲线。引物序列见表2。PCR反应体系:2μL DNA，0.5μL上、下游引物（5μmol/L），5μL 2×KAPA SYBR FAST qPCR Kit Master Mix和2μL无核酸酶水；反应条件:95℃10 min，40个循环变性/退火（95℃10 s，60℃1 min）和熔解曲线过程（60℃至95℃，每5 s上升0.5℃）。气溶胶样品中抗性基因的测定同样按照上述反应体系和条件进行。将样品某一抗性基因的Cq值带入到相应的标准曲线中计算出拷贝数，并计算每纳克DNA中该基因的拷贝数。