《表1 16S rRNA生物学鉴定引物》

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《西藏那曲市1株牦牛源产气荚膜梭菌的分离鉴定》

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取梭菌增菌培养基中的分离菌纯培养物，进行集菌，并采用煮沸法获得总DNA。采用细菌16S rRNA的通用引物进行扩增[11]，引物信息见表1。PCR反应体系，50μl:DNA模板2μl，2×Mix 25μl，上、下有引物各1μl，ddH2O 21μl。PCR反应体系94℃预变性5 min，94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸1 min，30个循环，72℃延伸10 min。PCR产物采用1%凝胶电泳检测，目的条带切胶回收，然后连接T载，连接后转化到Trans5α，挑选阳性菌送“生工生物工程（上海）股份有限公司”测序。并在GenBank中进行比对。