《表1 C.perfringens相关毒素和16S rRNA引物》

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《反刍动物源产气荚膜梭菌新疆流行株的分离鉴定及分型研究》

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根据GenBank中已公布的产气荚膜梭菌α、β、ε、ι、β2 5种毒素基因（cpa、cpb、etx、iap、cpb2）保守序列[8]（表1），采用Primer Premier 5.0软件设计引物。以纯化菌基因组DNA为模板，采用多重PCR技术扩增出目的片段，反应条件：95℃预变性10 min，95℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸40 s，共35个循环，然后72℃延伸6 min，4℃保护；β2基因反应条件：95℃预变性5 min，94℃变性30 s，45℃退火40 s，72℃延伸40 s，共35个循环，然后72℃延伸10 min。将PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测后，在紫外光灯下观察并记录PCR产物。将PCR产物目的片段与pMD19-T Simple载体连接，转化至E.coli DH5α感受态细胞内，通过菌液PCR筛选出阳性克隆后进行测序，并在NCBI中进行BLAST比对，根据所含的不同基因对产气荚膜梭菌新疆流行株进行毒素分型。