《表1 细菌16S rRNA和gyrB基因引物序列》

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《长薄鳅恶臭假单胞菌的分离鉴定及其感染的病理损伤》


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取对数生长期新鲜菌液,按照细菌基因组DNA提取试剂盒提取DNA。采用16S r RNA的通用引物[14]与gyrB基因的通用引物[15](表1)分别进行PCR扩增。PCR反应程序:95℃10min;94℃2 min,55℃1 min,72℃1 min 30 s,共35次循环;最后,72℃延伸10 min。PCR扩增产物经1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测,将纯化回收的PCR产物送成都擎科梓熙生物技术有限公司测序。将获得的分离菌16S r RNA与gyrB基因序列和已知GenBank数据库中进行Blast比对,使用MEGA 7.1用Neighbor-Joining法构建系统进化树。