《表1 养殖大鲵肠道细菌纯培养16S rRNA序列多样性对比》

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《养殖大鲵肠道细菌多样性》

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用Sanprep柱式DNA胶回收试剂盒将扩增后750 bp左右的目的条带切胶纯化回收。纯化产物与p MDTM19-T Vocter连接，连接产物转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞。阳性克隆子的初步筛选参照文献[15]，将转化后的细胞涂布含氨苄青霉素（100 mg/L）、X-gal、IPTG的LB琼脂平板37℃避光培养14～16 h进行蓝白斑筛选。对阳性PCR产物选用限制性核酸内切酶HaeⅢ对目标插入片段多态性分析（PCR-RFLP）后进行测序。将HaeⅢ酶切带谱分析不同，且测序结果也不同的克隆归为1个OTU。克隆文库覆盖率统计分析应用公式:C=[1-（n/N）]×100%[16]，这里n代表在16S rRNA基因克隆文库仅出现1次的OTU的数量，N代表16S rRNA基因克隆文库的总数。