《表1 本研究设计的黄热病毒RT-iiPCR检测引物和探针》

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《一种黄热病毒反转录恒温热隔绝式PCR检测方法》

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参照基于探针水解的POCKIT方法[11]设计黄热病毒RT-iiPCR检测引物和探针。扩增产物长度尽量控制在100 bp以内，TaqMan探针的解链温度最好比引物高5～10℃，探针不宜太长，可选用MGB探针以减少其长度增加其Tm值。首先从GenBank数据库中下载122条黄热病毒完整基因组序列，利用生物软件DNAMan6.0进行同源性比对，选择比较保守的5’UTR设计引物和探针，并用Oligo7.0进行评估[19]，变异位点引入简并碱基，通过预试验选择出最优引物（YFV-F、YFV-R）和探针（YFV-P）序列（表1）。