《表1 RAA检测人鼻病毒通用型引物和探针信息》

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《重组酶介导恒温扩增快速检测人鼻病毒的方法学研究》


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注:修饰方法:FAM:6-羧基荧光素;THF:四氢呋喃;BHQ:黑洞淬灭剂;磷酸盐:3'端磷酸盐来终止延伸。

经过NCBI数据库中人鼻病毒基因序列比对,采用RAA技术引物及探针设计原则进行的设计,共设计了3对探针和引物,通过筛选和评价(图1),确定上游引物、下游引物。根据仪器检测荧光的性能,以及探针的修饰方法优选原则:荧光报告基团修饰在探针序列离5'端碱基数14 bp的位置上;荧光淬灭基团修饰在探针序列离3'端碱基数29 bp的位置上,荧光报告基团与淬灭基团之间间隔3个碱基GAC,其中碱基A用四氢呋喃残基替换;经过修饰的探针确定(表1)。