《表2 PCR引物及探针序列》

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《苯甲酸对1～21日龄肉鸡生长性能和肠道健康的影响》

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鸡屠宰后，分离盲肠，取盲肠食糜，-80℃保存待测。使用天根生物公司提供的试剂盒提取盲肠食糜微生物的总DNA，-20℃保存备用。根据细菌的16S rRNA基因序列设计特异性引物，使用Bio-Rad公司CFX96实时定量PCR仪，应用Taqman探针进行荧光定量PCR反应，使用天根公司的Super Real Mater Mix进行检测。大肠杆菌和乳酸杆菌10μL反应体系，包括2×Super Realpre Mix5μL，上、下游引物各0.3μL，探针0.2μL，ddH2O3.2μL和DNA 1μL。大肠杆菌PCR标准程序为95℃预变性15 min，95℃3 s，60℃30 s，共40个循环。乳酸杆菌PCR标准程序为95℃预变性15 min，95℃3 s，60℃30 s，共50个循环。总菌20μL反应体系，包括SYBR Premix Ex TaqⅡ10μL，上、下游引物各0.8μL，50×ROX Reference Dye 0.4μL，ddH2O 6μL和DNA 2μL。总菌PCR标准程序为95℃预变性10 s，95℃5 s，59.5℃25 s，熔解曲线条件为65℃5 s，95℃1 min，95℃10 s，共40个循环。以每克内容物为检测单位，通过Ct值与标准曲线计算得出每份样品所含拷贝数，结果用每克内容物中细菌的拷贝数的常用对数表示[lg（拷贝数/g）]。PCR引物及探针序列见表2。