《表1 UHPLC与HPLC的主要区别》

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《茶多酚高通量检测技术研究进展》

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色谱柱作为高效液相色谱系统的“心脏”，是实现物质组分成功分离的必要条件，其主要的影响因素有柱填料、柱长度、柱孔径及填料粒径等，不同色谱柱的分离效果不尽相同。因此，茶多酚组分的HPLC法检测中色谱柱的选择显得尤为重要。目前来看，以硅胶为基质的反相C18柱的应用最为广泛。王丽丽等[19]选用Zorbax SB-C18与TSKgel ODS-100Z 2种色谱柱，在流动相为2‰的甲酸水溶液（A相）和甲醇（B相），洗脱方式为83%A（0 min）→75%A（5 min）→73%A（7 min）→58%A（16 min）→83%A（18 min），柱温为40℃，流速为1.0 mL/min，检测波长为280 nm的条件下对茶叶中儿茶素类及茶叶碱等12个组分进行了检测分析，结果发现，Zorbax SB-C18色谱柱对表儿茶素（EC）、咖啡碱（CAF）、没食子儿茶素没食子酸酯（GCG）等3种组分分离效果差，TSKgel ODS-100Z色谱柱则对各种组分分离良好。Joseph等[20]分析比较6种反相色谱柱在相同条件下对茶叶中儿茶素类分离效果，色谱条件为:流动A相为水和0.05%三氟乙酸，流动B相为乙腈和0.05%三氟乙酸，洗脱程序为12%B（0 min）→21%B（25 min）→25%B（30 min）→100%B（35 min），流速为1 mL/min，检测波长210 nm，结果表明Zorbax Eclipse XDB-C18柱分离效果最好，儿茶素组分均完全分离，峰型良好，重复性好，相关系数均达0.995以上。传统的HPLC法检测分析茶多酚组分常用的色谱柱规格为内径4.6 mm，柱长250 mm或150 mm，固定相粒径5μm。柱内径和填充物粒径大小是考察色谱柱性能的重要参数，柱内径越小，填充颗粒粒径越小，分离效率越高。Van Deemter方程认为固定相填充物的粒径小于2.5μm时，分离效率显著提高，然而工作产生的压力也就越大。因此，人们认为进一步减小固定相粒径来提高HPLC的检测性能并不可行，超高压液相色谱（UHPLC）的出现打破了这个观念。与传统的HPLC法相比，UHPLC的柱压更高、固定相粒径小、柱内径小、运行时间短，从而分辨率更高、灵敏度更高以及检测限更低（表1）。研究表明，UHPLC比传统的HPLC分离效率高出3～7倍。Ortega等[21]采用传统的HPLC法分析黄酮类化合物，需要80 min，而UHPLC分析相同的样品，分析时间缩短到12.5 min。郭颖等[22]研究认为采用传统HPLC法分析茶叶中的6种主要儿茶素以及咖啡碱和没食子酸，程序复杂，时间长至30～50 min，而采用UHPLC在6 min内就完成较好的分离，且线性良好，精密度和重复性的RSD均小于1%，回收率在95%～107%之间。Guillarm等[14]则采用UHPLC法分析比较Acquity BEH C18柱、Hypersil Gold C18柱、Acquity BEH phenyl柱、Acquity BEH Shield RP18柱4种色谱柱对儿茶素类检测分析的效果，结果表明，Acquity BEH Shield RP18柱分离效率最好，峰型最好，36 s内8种儿茶素完全分离。