《表1 4种碱基各谱峰位置归属》

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《DNA碱基激光拉曼光谱检测方法的研究》

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图2分别为4种碱基的激光拉曼光谱图。腺嘌呤在327、534、622、723、942、1 126、1 248、1 331、1 480 cm-1位移处出现了较明显的谱峰（图2A），其中强度最大的在723 cm-1和1 331 cm-1处。723 cm-1处的谱峰指征整个腺嘌呤分子嘌呤环的呼吸振动，由于其分子内部存在双环的基本构架，所以此处腺嘌呤的呼吸振动峰更强；1 331 cm-1处的谱峰指征腺嘌呤分子内C—N、C—C的伸缩振动以及C—H、N—H在平面内的摆动振动，反映了腺嘌呤的结构特征，对其检测和定性分析具有重要作用。图2B表明，鸟嘌呤在398、494、648、940、1 228、1 547 cm-1拉曼位移处出现了明显的谱峰，且648、1 228 cm-1处的谱峰较强，前者指征鸟嘌呤分子内部双环的呼吸振动，后者是C—C、C—N平面内伸缩振动和N—H平面内的摇摆振动，两者可作为特征峰对鸟嘌呤碱基定性和定量分析。图2C表明，胞嘧啶在400、548、598、791、972、1 108、1 274、1 361、1 651 cm-1处出现了明显的拉曼光谱峰，其中791、1 274 cm-1处的谱峰较强。791 cm-1处谱峰指征胞嘧啶分子内环的呼吸振动；1 274cm-1处谱峰指征分子内部C—C、C—N在平面内的伸缩振动和N—H在平面内的摇摆振动，两者均可作为特征峰对胞嘧啶进行定性和定量研究。从图2D可知，胸腺嘧啶在427、479、564、615、740、803、984、1 368、1 672 cm-1处出现了明显的拉曼谱峰，其中在615、740、1 368、1 672 cm-1处拉曼谱峰较强。615 cm-1处谱峰指征胸腺嘧啶碱基内部N—C—O的弯曲振动；740 cm-1处谱峰指征胸腺嘧啶碱基内部平面上分子的呼吸振动；1 368 cm-1处谱峰指征分子内部N—H在平面内的弯曲振动和 在平面内的伸缩振动；1 672 cm-1处指征分子内部 在平面内的伸缩振动。上述4个较强谱峰可用于胸腺嘧啶的定性和定量分析。4种碱基各谱峰的详细归属如表1所示。通过谱峰归属发现，每种碱基均有很多特征谱峰，这些峰均可作为鉴别碱基的理论谱峰。但是部分拉曼谱峰相对较弱，在混合物检测中容易被邻近谱峰或干扰信号所覆盖，所以选择较强谱峰用作碱基鉴别的理论特征峰。