《表1 Primer Premier5.0设计的引物序列》

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《启动子探针载体的构建及橡胶树白粉菌启动子筛选鉴定》

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以质粒pBI121为模板，用Primer Premier5.0设计引物Kan F/R、35SF/R（表1）分别扩增卡那霉素抗性基因Kan的编码区序列和CaMV35S启动子序列。PCR扩增条件:95℃预变性5 min；95℃50 s，56℃40 s，72℃50 s共35个循环；72℃5 min。将扩增得到的大小一致的目的片段用琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒纯化回收。用Bam HI和HindIII双酶切纯化产物Kan和质粒pUC19，再用DNA产物纯化试剂盒分别回收双酶切的目的片段和质粒片段，在T4DNA连接酶的作用下16℃进行连接，构建pUC19-K质粒，转化克隆菌株大肠杆菌DH5α，通过菌液PCR和酶切验证筛选阳性克隆并进行测序。