《表1 Primer 3设计合成的引物序列》

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《桂枝茯苓丸对慢性非细菌性前列腺炎大鼠的治疗作用及机制研究》

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处死大鼠后打开腹腔，取前列腺腹侧叶和一部分膀胱黏膜组织至新的1.5 ml EP管中，用玻璃棒研磨，加入Trizol 1 ml充分振荡混匀，加入氯仿0.2 ml，盖紧后用力摇15 s，15～30℃孵育2～3 min，4℃12 000×g离心15 min，取上清液，根据说明书使用Trizol试剂提取总RNA；使用ThermoScript RT-PCR系统将总RNA（1 mg）合成为模板DNA。引物分别为ERβ（NM＿012754）、ERα（NM＿012689）、TNF-α（NM＿012675）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS，XM＿003750865）、环氧酶2（COX2，NM＿017008）、三磷酸腺苷受体（P2X2，NM＿207608）、瞬时受体电位通道A1（TRPA1，XM＿008769306）、神经生长因子（NGF，NM＿001277055）和内参基因GAPDH（NM＿017008）。其中引物ERβ、ERα、TNF-α、COX2、NGF和GAPDH由QIAGEN（QuantiTect Primers）预先设计和验证，其他引物由Primer 3软件设计（表1）。PCR反应体系50μl，反应条件为:94℃30 s、55℃30 s、72℃60 s，最后72℃延伸7 min，共30个循环。SYBR Green法荧光定量PCR分析各基因的表达并利用2-ΔΔCT法分析相应的数据，取每个靶基因与GAPDH的表达比值为相对表达的结果。