《表1 RT–PCR所用引物》

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《硝态氮对组培‘嘎拉3’叶绿素合成及相关基因表达的影响》

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分别取两种培养基处理后0，7，14，21，28 d的组培‘嘎拉3’叶片，置于液氮中速冻后放–80℃冰箱备用。总RNA的提取用TIANGEN（天根）试剂盒，然后进行琼脂糖凝胶电泳，证实RNA有18S和28S两条明显的完整条带。以提取的RNA为模板，用反转录试剂盒PrimeScript TM RT reagent Kit with gDNA Eraser（Perfect Real Time，Ta KaRa）进行反转录获得cDNA，采用SYBR?Premix Ex Taq TM（Tli RNaseH Plus）试剂盒（宝生物）进行荧光定量PCR反应。引物设计在Phytozome 10.3中找到基因的序列，采用软件DNAMAN设计荧光定量特异性引物（表1）。最终采用Comparative CT（2–ΔΔCt）法进行数据分析[22]。