《表1 RT-PCR所用的引物序列》

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《tDCS对中风大鼠功能恢复和Notch信号通路的影响》

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脑组织总核糖核酸（ribonucleic acid，RNA）提取采用TRIzol试剂盒（购自美国Invitrogen公司）提供的提取步骤，各组大鼠深度麻醉后，取新鲜脑组织，分离出海马和纹状体，将组织剪碎后按组织重量每100 mg加入1 m L RNase plus，将组织研磨充分后离心，取上清溶液，加入氯仿（RNase plus和氯仿体积比为5∶1），剧烈震荡后室温静置5 min，离心取上清液．向上清液中加入等体积的异丙醇溶液，充分混匀后室温静置10 min．离心后弃上清，沿离心管壁缓慢加入体积分数为75%的乙醇1 m L，轻轻上下颠倒充分洗涤离心管壁残留的提取液，离心后小心吸出乙醇，室温放置5 min使沉淀完全干燥后加入适量的RNase-free水，用酶标仪检测RNA浓度，随后于-80℃保存．用RT-PCR逆转录试剂盒（购自美国Takara公司）将RNA反转录成互补脱氧核糖核酸（complement deoxyribonucleic acid，cDNA）．逆转录产物采用实时荧光定量试剂盒（购自美国Takara公司）进行定量分析．每40 ng cDNA模版加入实时荧光定量试剂盒中的2×SYBP green mix10μL，上下游引物各0.8μL，并加入7.2μL无RNA酶的水，使反应体系最终体积为20μL．整个扩增过程采用两步法:NeuN，GFAP，SYP采用95℃，30 s；95℃，5 s，55℃，20 s；共40个循环．Notch信号通路的检测采用95℃，30 s；95℃，5 s，60℃，20 s；共45个循环．引物序列如表1．实验结果采用2-△△CT法，即