《表1 β-actin、miR-148b引物序列》

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《miR-148b在非小细胞肺癌患者血清中的表达水平及其预后价值分析》

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非小细胞肺癌患者及健康体检者清晨空腹肱静脉抽血，置于10 m L无菌采血管中，室温静置30min，4500r/min，离心10 min，分离血清，-70摄氏度冻存备用，测定miR-148b mRNA浓度和纯度，设计待测基因位点的PCR扩增引物和单碱基延伸引物，按20μL模板和50μL反应液构成PCR反应体系，扩增程序:97℃6 min；92℃14 s，63℃40 s，50个循环，63℃时采集荧光（见表1），反应体系为:2×μByr一步法RT-qPCR缓冲液，5μL、正向引物10μm，0.4μL、反向引物，10UM，0.4μL、超级酶混合物，0.2μL RNA模板，0.6μL、无核糖核酸酶水，3.4μL。实时荧光定量PCR仪检测其表达量。