《表1 miRNA-138、β-actin RNA引物序列》

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《miR-138调节SIRT1p-STAT3通路抑制高糖诱导肾小球系膜细胞炎性反应及纤维化》

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3．各组大鼠肾小球系膜细胞株miRNA138 RNA水平的检测:取5ml细胞液（细胞浓度为5×106/ml），5000r/min离心5min，miRNeasy Mini试剂盒（美国Qiagen公司）提取总RNA，NanoDrop1000（美国NanoDrop公司）定量RNA纯度。TaqMan MicroRNA Reverse Transcription试剂盒（美国Applied Biosystems公司）进行RT反应。为合成cDNA，将反应混合物依次在16℃下孵育30min，在42℃下孵育30min，在85℃下孵育5min。参照GenBank数据获取2个基因多态性位点的序列，设计待测基因位点的PCR扩增引物和单碱基延伸引物（参照http://links.lww.com/MD/A675），按20μl模板和10μl反应液构成PCR反应体系，扩增程序:95℃5min；93℃10s，61℃30s，重复40个循环，61℃时采集荧光（表1、表2）。实时荧光定量PCR仪检测其表达量。