《表3 实时荧光定量PCR引物序列》

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《啤酒酵母粉替代部分鱼粉对牛蛙生长、抗氧化能力以及肝脏和肠道组织形态学的影响》

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使用TRIzol试剂（TaKaRa公司）提取-80℃冻存的肝脏组织总RNA，用Bio-Rad SmartSpec plus对所提取总RNA的OD260 nm和OD280 nm值进行检测并计算二者比值，以确定提取的总RNA的纯度，用1.5%的琼脂糖凝胶电泳鉴定其完整性。使用PrimeScript RT Reagent Kit With gDNA Eraser（Perfect Real Time）试剂盒（TaKaRa公司）将总RNA反转录为cDNA，-20℃保存备用。使用SYBRPremix Ex TaqTM（TliRNase HPlus）试剂盒（TaKaRa公司），通过QuantStudioTM6 Flex荧光定量PCR仪进行实时荧光定量PCR。以β-肌动蛋白（β-actin）为内参基因，目的基因热休克蛋白70（HSP70）和胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）的表达结果采用相对表达量的形式，以2-ΔΔCt法[34]进行计算。引物使用Primer 5.0设计，如表3所示。