《表1 引物序列及产物大小》

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《不同浓度乙醇洗脱沙葱黄酮对脂多糖诱导的小鼠腹腔巨噬细胞的抗炎作用》

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调整细胞浓度为2.5×106个/mL，接种于6孔细胞培养板，每孔1 mL。试验分组同1.2.3，培养4 h后，弃掉培养上清液，使用预冷的PBS洗涤细胞2次，收集细胞，根据总RNA小量制备试剂盒说明书步骤对细胞总RNA进行提取，于多功能酶标仪测定提取所得总RNA的浓度及纯度，260 nm/280 nm处吸光度于1.8~2.0内表明RNA纯度较好，可用于后续试验。根据PrimeScriptTM RT reagent Kit试剂盒说明书将总RNA反转录为cDNA，反转录体系为20μL。使用Roche 480实时荧光定量PCR系统及Premix Ex TaqTMⅡ试剂盒检测目的基因mRNA相对表达量，反应体系为20μL。实时荧光定量PCR的反应程序为95℃30 s；95℃5 s；60℃20 s，40个循环；95℃15 s；60℃20 s；绘制熔解曲线。β-肌动蛋白（β-actin）作为管家基因，2-ΔΔct法计算目的基因mRNA相对表达量。引物序列及产物大小[13-14]见表1。