《表1 引物序列及产物大小》

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《盐应激对大肠杆菌O157:H7存活和毒力基因表达的影响》

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real-time PCR用SYBR Premix Ex TaqTM II(Perfect Real Time）试剂盒（大连宝生物工程有限公司），在real-time PCR仪上进行。采用Primer Primer 6.0和Beacon designer软件进行荧光引物的设计，由生工生物工程（上海）有限公司负责引物的合成，引物序列如表1所示[19]，用于扩增大肠杆菌O157:H7的stx1、stx2、eae、hly 4种毒力基因，内参基因为16S rRNA基因。PCR扩增体系（20μL）为：10μL SYBR Premix Ex Taq(2×），0.4μL ROX Reference Dye II(50×），1.0μL cDNA模板，上下游引物：各0.4μL，7.8μL RNase Free水。PCR程序：95℃预变性30 s(1次循环）；95℃变性5 s，60℃退火和延伸34 s(40个循环）；熔解：95℃、15 s，60℃、1 min，95℃、15 s(1次循环）。