《表1 Co PIF3基因所用引物序列》

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《油茶CoPIF3基因的克隆及表达分析》

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GAATTC、GTCGAC分别为Eco RI和Sal I的酶切位点。

根据油茶转录组数据，从PIFs家族中选择1条差异基因，将其命名为Co PIF3，使用Primer Premier5.0软件设计CDS扩增引物Co PIF3-F/R（表1)，以油茶‘华硕’自交72 h后雌蕊提取的c DNA为模板进行PCR扩增，PCR反应体系参照Prime STAR?HS （Premix）（Ta Ka Ra，大连）说明书，体积为25μL:Prime S-TAR?HS 12.5μL、10μmol·L-1上下游引物各0.5μL、模板0.5μL，用dd H2O补齐至25μL。PCR反应条件为:95°C预变性3 min；95°C变性30 s，55°C退火30 s，72°C延伸2 min，35个循环；72°C延伸10min。以油茶叶片DNA为模板扩增时，PCR反应条件为:95°C预变性3 min；95°C变性30 s，55°C退火30 s，72°C延伸3 min，35个循环；72°C延伸10 min。PCR产物经1.3%琼脂糖凝胶电泳检测，使用Gel Extraction Kit （OMEGA Bio-Tek，美国）试剂盒回收经回收后将获得片段连接到p Clone007载体上，转化大肠杆菌（Escherichia coli）DH5α感受态细胞(TSINGKE，北京），并进行测序验证。引物合成和序列测定由擎科生物技术有限公司（湖南）完成。