《表1 引物序列：PAK6、p53在膀胱癌中的表达及其临床意义》

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《PAK6、p53在膀胱癌中的表达及其临床意义》

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取出用6板孔培养好的3组细胞，冲洗，在每个孔中加入500μl Trizol试剂并按照步骤提取出细胞中的总RNA，并使用分光光度仪检测RNA浓度。再用反转录试剂盒将提取的RNA合成cRNA，根据合成的模板cRNA对PAK6及p53基因进行实时荧光定量PCR反应。引物序列可见表1。反应体系:SYBR Premix Ex TapⅡ10μl，模板DNA 2μl，正向引物0.8μl，ROX Reference Dye or DyeⅡ0.4μl，DEPC H2O 6 ml。反应条件:95℃30 s，95℃3 s，60℃10 s。共进行40个循环后72℃延伸5 min。反应完成后，取5μl扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。