《表2 API 50CH试验条成分》

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《O2血清型肺炎克雷伯氏菌多糖结合疫苗的生物合成》

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通过λ-Red重组技术敲除了Kp355 waa L基因，缺失株PCR验证结果如图1A所示，用内部引物PCR扩增后，缺失株结果为阴性，而野生株为阳性；外部引物扩增后缺失株和野生株产物的条带大小均符合理论值1.4 kb和2.2 kb，并且外部引物扩增产物测序结果与理论序列结果一致；khe引物为验证Kp种属特征性引物[10]，以排除杂菌污染。结果表明我们在基因层面成功敲除了waa L基因，得到缺失株Kp355△waa L。之后将蛋白酶K消化后的野生株和缺失株全菌蛋白样品经SDS-PAGE分离后进行银染，结果如图1B所示，由于野生株LPS O侧链重复单位的数量并不相同，因此呈现分子量差异相对固定的典型梯状LPS条带[5]，而缺失株由于waa L基因缺失糖链无法转移到脂质A核心，因此无LPS典型条带。接着，又对Kp355和Kp355△waa L的生长状态和生理生化特性进行了探究。结果如图1C所示，两株菌生长曲线无明显差异，通过参考API 50CH试验条成分（表2）发现其糖代谢能力除D-塔格糖以及2-酮基-葡萄糖酸盐代谢有略微差异外，其他种类糖代谢未见明显差异（图1D），表明waa L基因的缺失对菌株的生长和代谢无明显影响。