《表1 基因敲除引物：O2血清型肺炎克雷伯氏菌多糖结合疫苗的生物合成》

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《O2血清型肺炎克雷伯氏菌多糖结合疫苗的生物合成》

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利用λ-Red重组系统[8]敲除Kp355 waa L基因。根据Kp355 waa L基因及其上下游序列，设计构建基因打靶片段所需引物，具体引物名称及序列见表1。其中引物waa L-up-F、waa L-up-R扩增waa L基因上游同源臂，waa L-dw-F、waa L-dw-R扩增下游同源臂；同时为了验证突变体构建是否成功，设计了基因组上waa L基因上下游同源臂以外的一对引物waa L-out-F和waa L-out-R，内部检测引物waa L-in-F和waa L-in-R。将上下游同源臂通过酶切连接的方式，分步连接到载体p ET-Kan上；之后以含有靶基因上下游同源臂的载体p ET-Kan为模板，利用引物waa L-up-F和waa L-dw-R扩增waa L基因打靶片段，将扩增产物进行回收得到打靶片段。