《表1 引物信息：'凤丹白'牡丹PoMYB1转录激活及表达特性分析》

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《'凤丹白'牡丹PoMYB1转录激活及表达特性分析》

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下划线：酶切位点序列；Po：牡丹；Tubulin：微管蛋白；下同

采用RNA prep Pure多糖多酚植物总RNA试剂盒提取S1时期'凤丹白'雌蕊总RNA。按照最终反转量为1μg，对RNA进行c DNA合成，建立20μL反应体系。将反转录产物保存-20℃备用。根据'凤丹白'雌蕊转录组数据库中的MYB转录因子Unigene序列设计5'RACE扩增和3'RACE的扩增引物（表1）并进行PCR扩增。PCR反应体系（25μL）:10μmol/L上下游引物各0.5μL，5 U/μL LA Taq聚合酶0.25μL，10×PCR BufferⅡ2.5μL，2.5mmol/L d NTP 4μL，1μg/μL总c DNA 1μL，dd H2O补足。PCR扩增程序：95℃预变性3 min；95℃变性40 s，60℃退火30 s，72℃延伸1 min，30个循环；72℃延伸10 min，4℃保存。PCR产物经1%的琼脂糖凝胶电泳检测后，利用DNA凝胶回收试剂盒（青岛擎科公司）回收目的DNA，并连接至p MD-18T载体，转化大肠杆菌（Escherichia coli） DH5α感受态细胞，经菌液PCR鉴定后，由青岛擎科梓熙生物工程有限公司进行测序。