《表1 各基因引物序列：结肠癌细胞增殖和侵袭过程中miR-92a和miR-29c的表达及其意义》

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《结肠癌细胞增殖和侵袭过程中miR-92a和miR-29c的表达及其意义》

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离心收集转染后的结肠癌细胞系，采用miRNeasy Mini Kit法提取细胞中的RNA，并对抽提得到的RNA进行体外反转录得到cDNA，反转录反应:总RNA量为1μg，反转录体系为20μL，步骤按说明书进行，反应条件:42℃60 min，85℃5min，反应所得cDNA产物于-20℃保存。实时定量PCR反应体系为20μL，扩展U6为内参，步骤参照说明书进行，反应条件:95℃2 min，94℃30s，58℃30s，72℃30s，共45个循环。每个样品做3个平行重复，荧光PCR的扩增产物经3%的琼脂糖凝胶电泳分析验证，样品中荧光信号达到仪器设定的阈值的循环数即为Ct值。采用ΔCt法计算miR-92a和miR-29c在组织中的相对表达量。各个基因的引物序列见表1。