《表5 RT-q PCR反应体系》

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《三叶青块根发育时期RT-qPCR内参基因的筛选与体系建立》

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在遮光条件下，在八连管（购于罗氏）中加入dd H2O 8.8μL，Trans Start誖Tip Green q PCR Super Mix（购于北京全式金）10μL，上游引物（F，10μmol/L）下游引物（R，10μmol/L）各0.4μL，待测模板（c DNA）0.4μL，总反应体系20μL （表5）。q RT-PCR反应程序为：95℃1 min预变性；94℃10 s变性，58℃30 s退火，72℃30 s延伸，40个循环。溶解曲线为：95℃15 s，65℃1 min，95℃Continuous。在罗氏LC480定量PCR仪中进行反应，获得相应CT值。