《表1 PCR扩增引物的名称及产物》

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《重庆市某三甲医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药特征及耐药基因的流行情况》

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(1）模板制备：CRE菌株DNA采用煮沸法提取，放-20℃冰箱保存备用。（2）碳青霉烯酶基因的PCR检测：以CRE菌株DNA为模板分别对blaKPC-2、blaIMP-1、blaVIM-2、blaNDM-1和blaOXA-485种基因型进行PCR扩增，反应条件参照文献[5-6]进行，见表1。PCR反应体系为25μL，包括12.5μL Taq PCR Master Mix，2μL上下游引物，1μL DNA模板，9.5μL ddH2O。PCR反应条件为先94℃预变5 min，再94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸30 s或者60 s（具体根据产物长度而定）；变性、退火、延伸30个循环；最后72℃继续延伸7 min。将PCR扩增产物置于2.0%琼脂糖凝胶电泳25 min，然后再通过凝胶成像仪观察结果。（3）碳青霉烯酶基因测序：将PCR扩增阳性的产物送深圳华大生物技术有限公司进行测序，将测序所得的序列与GenBank核酸数据库进行BLAST序列比对，将相似度最高的基因型作为待测细菌的基因类型。