《表4 用于疫苗接种后云斑尖塘鳢脾脏转录组qPCR验证引物》

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《病毒灭活疫苗诱导云斑尖塘鳢脾脏转录组分析》

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从转录组数据中选取IL-1β、IL-12、MHCⅠ、MHCⅡ等4个差异表达的免疫相关基因以及内参基因18s RNA，经过Blast后用Primer Primer 5.0软件设计引物（表4），并送上海生工生物工程技术服务有限公司合成。SYBR qPCR Master Mix（Low ROX Premixed）购自南京诺为赞生物科技有限公司，反应体系为2x SYBR qPCR Master Mix 10μL、模板2μL、上下游引物各0.5μL，补加灭菌蒸馏水至20μL，然后将加好样品的96孔板放入荧光定量PCR仪中进行反应，设置反应程序为95℃，3 min；95℃，15 s，60℃，1 min，40个循环，每个样品设3个生物学重复。