《表1 引物序列：RFX5调控原钙粘蛋白α基因簇的表达》

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《RFX5调控原钙粘蛋白α基因簇的表达》

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sg RNA引物中带下划线部分为构建质粒所需的粘性末端。P7-index中带下划线部分为index。

设计合成sgRNA的寡核苷酸序列如表1所示。购买的单链sgRNA首先用ddH2O稀释为终浓度20μmol/L，接着进行引物退火步骤，反应体系如下（总体积为20μL）:2μL sgRNA-F，2μL sgRNA-R，2μL 10×NEB Buffer 2，14μL ddH2O，经微量移液器吹打混匀后放入PCR仪中。反应条件为：95℃预变性5 min，缓慢降温95℃20 s 351个循环（自第二个循环开始逐步降温，每个循环降温0.2℃），最终产物4℃保存。