《表2 CASP基因定量PCR引物序列》

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《文心兰类原球茎形态建成及电子传递蛋白和凯氏带蛋白基因的极性表达模式分析》

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运用罗氏Light Cycler 480仪器，通过q PCR检测CASP基因及FNR和Fd基因在文心兰不同组织部位的表达情况。根据实时荧光定量PCR引物设计原则，设计CASP基因及FNR和Fd基因的q PCR引物（表1、表2），以及内参基因Actin的特异性引物Actin-Q-F和Actin-Q-R（表1）。采用SYBR premix Ex TaqTMⅡkit （Ta Ka Ra）进行q PCR反应，反应体系为20μL:SYBRⅡ酶10μL，dd H2O 7.4μL，c DNA 1μL，上下游引物各0.8μL。反应条件为：95℃预变性30 s；95℃变性10 s，60℃退火30 s，72℃延伸15 s，45次循环。数据分析采用2?(35）（35）CT法获得CASP基因及FNR和Fd基因的相对表达量，采用SPSS 19.0对CASP基因及FNR和Fd基因的表达分别进行差异显著性分析，用ORIGIN 8.5进行绘图。