《表3 菠萝酸性转化酶蛋白的二级结构及亚细胞定位》

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《菠萝酸性转化酶基因家族初步生物信息学及表达分析》

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通过基因名查找在菠萝基因组数据库里找到4个酸性转化酶基因（2个Ac CWINs和2个Ac AINs），将其分别命名为Ac CWIN1、Ac CWIN2和Ac VIN1、Ac VIN2，以提取的菠萝果肉RNA为模板，用设计的全长特异性引物进行RT-PCR扩增，分别得到大小为1539、1527、1929、1914 bp的DNA片段（图1），将目的DNA片段测序后通过NCBI Blast序列比对，结果显示，所克隆的Ac CWIN1、Ac CWIN2和Ac VIN1、Ac VIN2全长序列与基因组已预测的对应的菠萝基因具有较高的同源性，分别为99.48%、90.98%、92.25%、99.57%，证明所克隆的目的基因为预测的菠萝细胞壁酸性转化酶基因和菠萝液泡酸性转化酶基因。其基本理化性质的分析结果见表2，2个Ac CWINs均分布在20号染色体上，Ac VIN1分布在3号染色体上，而Ac VIN2分布在22号染色体上，相应蛋白的氨基酸数目为508～642个，分子量在57.19～70.98 k Da之间；Ac CWIN1等电点为8.50呈碱性，Ac CWIN2和Ac VIN1、Ac VIN2等电点均小于7.0，呈酸性；Ac VIN1和Ac CWIN1蛋白不稳定指数小于40，为稳定蛋白，Ac VIN2和Ac CWIN2不稳定指数大于40，为不稳定蛋白；所有的Ac AINs蛋白为亲水性蛋白。其蛋白二级结构的分析结果见表3，4个Ac AINs蛋白二级结构均由?-螺旋、扩展链结构、?-转角和无规则卷曲组成，且各组成的百分比均为无规则卷曲>扩展链结构>?-螺旋>?-转角。亚细胞定位预测Ac CWIN1和Ac CWIN2定位于细胞壁，而Ac VIN1和Ac VIN2定位于液泡中。