《表5 引物序列：尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)应答碱胁迫过程中microRNAs深度测序分析与鉴定》

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《尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)应答碱胁迫过程中microRNAs深度测序分析与鉴定》

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根据测序获得的mi RNA序列，设计颈环引物，由上海生工生物工程有限公司合成（表5）。按照miRNAFirst Strand c DNA Synthesis （Stem-loop Method）试剂盒（Sangon）说明，将总RNA反转录为c DNA，反应体系为20μL:10μL 2×mi RNA L-RT Solution mix，1.5μL mi RNA L-RT Enzyme mix，4μg total RNA；1μL stem-loop primer（10μmol/L），RNase-free water定容至20μL。得到的c DNA保存于-20℃用于后续荧光定量实验。