《表1 基于变异位点设计的功能表标记和测序引物》

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《水稻氮高效基因NRT1.1B功能标记开发和资源筛选》

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注:小写字母加粗标识的核苷酸表示错配核苷酸，下划线加粗的核苷酸表示功能突变位点核苷酸

以‘日本晴’和‘IR24’的DNA为模板，利用设计的3对等位基因PCR功能标记进行梯度PCR扩增（表1），PCR产物在1.5%琼脂糖电泳分析。结果表明：nrt1.1b基因型设计引物1nrt （NRT-F和1nrt-R）可以扩增出‘日本晴’中nrt1.1b目标条带，且不能扩增出‘IR24’中NRT1.1B非目标条带（图1A）；NRT1.1B基因型设计引物1NRT （NRT-F和1NRT-R）可以扩增出‘IR24’中NRT1.1B目标条带，且不能扩增‘日本晴’中nrt1.1b非目标条带（图1B）；nrt1.1b基因型设计引物2nrt （NRT-F和2nrt-R）既不能扩增出‘日本晴’中nrt1.1b目标条带，也不能扩增出‘IR24’中NRT1.1B目标条带（图1C）；NRT1.1B基因型设计引物2NRT（NRT-F和2NRT-R）既不能扩增出‘IR24’中NRT1.1B目标条带，也不能扩增出‘日本晴’中nrt1.1b目标条带（图1D）；nrt1.1b基因型设计引物3nrt （NRT-F和3nrt-R）可以扩增出‘日本晴’中nrt1.1b目标条带但扩增效率低，且不能扩增出‘IR24’中NRT1.1B非目标条带（图1E）；NRT1.1B基因型设计引物3NRT （NRT-F和3NRT-R）可以扩增出‘IR24’中NRT1.1B目标条带，且不能扩增出‘日本晴’中nrt1.1b非目标条带（图1F）。因此，可以利用1nrt/1NRT鉴定NRT1.1B不同基因型。