《表1 PCR所用的2对引物》

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《基于cytb引物的鱼粉原料鱼组成分子鉴定方法》

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将鱼类及鱼粉样品用天根生化科技有限公司的DNA试剂盒提取总DNA。根据文献[23-24]，选取2对引物作为候选引物，并由广州天一辉远生物科技有限公司合成（表1）。用这2对引物分别对提取的鱼类和鱼粉样品DNA进行扩增，反应体系50μL，包括：PCR缓冲液5μL，无菌水30.75μL，正、反向引物（10μmol/L）各2μL，DNA模板2μL，dNTP（2.0 mmol/L）5μL，MgCl2（25 mmol/L）3μL，Taq聚合酶（5 U/μL)0.25μL。反应条件为：95℃预变性5 min，95℃变性30 s，53℃退火30 s，72℃复性45 s，35个循环，72℃延伸10 min。反应结束后，分别取5μL扩增产物，用1.0%琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。挑选出对鱼类和鱼粉样品DNA都能够良好扩增的引物，对其PCR扩增产物进行纯化、回收。