《表1 BmdsRNase编码基因扩增的引物》

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《家蚕碱性核酸酶BmdsRNase的原核表达和对dsRNA的降解效果》


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1)小写字母gaattc为酶切位点。

以家蚕中肠c DNA为模板,按照文献[7]的方法,以表1中编号1~3的引物对扩增BmdsRNase 3个无酶切位点的基因片段。利用Taq聚合酶(Ta KaRa公司),以表1中编号4~6的引物对扩增BmdsRNase 3个含酶切位点的基因片段。PCR采用50μL反应体系:10×PCR Buffer(Mg2+plus)5μL,2.5 mmol/L d NTP Mixture 4μL,5 U/μL Taq聚合酶0.25μL,10μmol/L上、下游引物各1μL,c DNA 5μL,RNase-free H2O 33.75μL。反应程序:94℃预变性5 min;以94℃30 s、55℃30 s、72℃90 s为一个循环,共循环40次;72℃延伸10 min。