《表2 遗传转化过程的培养基配方》

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《紫花苜蓿UFO基因克隆及转化》

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将测序结果符合预期的农杆菌在含有50 mol/L卡那霉素的培养基中划线活化，将单菌落挑取至100 mL YEB培养液中进行培养，以备侵染。将紫花苜蓿修剪至5 cm高度，待长出新的幼嫩叶片时开始进行取样，将取得的幼嫩叶片在50%次氯酸钠中进行灭菌，20 min后在超净工作台中用无菌水冲洗5～10次。将菌液倒入50 mL离心管中，600 r/min离心20 min，离心后弃掉上清液，将Ms-COLQ培养液加入离心管中并与管内农杆菌充分混匀，待菌液OD值处于0.4～0.6之间时对叶片进行侵染。将叶片剪开后放入事先备好的无菌锥形瓶中，将菌液倒入，抽真空3 min后，将锥形瓶置于低速摇床中2 h。将已侵染的叶片置于Ms-CO培养基中，24℃避光培养3 d。共培养结束后用头孢水溶液（200 mg/L）将叶片进行冲洗，而后移入Ms-YD培养基中培养（光照16 h/黑暗8 h，温度24℃，光照强度40 Lux）。6周后，将抗性愈伤组织转移至Ms-SY培养基中，并拆分成直径为1～2 cm大小的愈伤组织进行光下生芽培养（光照16 h/黑暗8 h，温度24℃，光照强度60 Lux）。生芽培养2个月后，将抗性愈伤组织转移至Ms-SG培养基中进行生根培养。待外植体根长大于2 cm时，将紫花苜蓿幼嫩植株转移至灭菌土中进行培养。遗传转化过程中所用的培养基成分见表2。