《表1 hMeDIP-PCR引物》

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《根尖牙乳头干细胞调控Foxp3位点去甲基化促进CD4~+T细胞向调节性T细胞转化的研究》

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收集各组CD4+T细胞，按照DNA提取试剂盒说明书提取基因组DNA并定量；每组各取1μg DNA，进行超声波打断，使DNA片段化，琼脂糖凝胶电泳验证片段长度，介于200～600 bp之间方可进行后续实验；每组各取1μg片段化DNA（记为input DNA），此外预留100 ng DNA（记为10%input DNA）待用；以input DNA作为样本，加入4μL 5hmC抗体以结合含有5hmC的DNA片段，4℃孵育过夜；加入20μL蛋白质G磁珠，室温孵育2 h，收集磁珠并加入洗脱液，将与5hmC抗体、磁珠结合的DNA片段洗脱（记为5hmC DNA），随后将两组中富集所得的5hmC DNA与预留的10%input DNA同时进行DNA纯化并定量，纯化步骤按照DNA纯化试剂盒说明书进行。设计合成Foxp3位点启动子区、CNS2区引物（表1），分别以纯化后各组10%input DNA、5hmC DNA作为模板，采用RT-qPCR技术进行扩增，随后按照相对定量的方法对每组富集所得5hmC DNA片段量进行定量并比较，计算公式为：5hmC相对表达量=10%×2[CT（10%input DNA）-CT(5hmC DNA）]。