《表1 TCH4 CRISPR T1代植株的编辑类型及比例》

《表1 TCH4 CRISPR T1代植株的编辑类型及比例》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《一种CRISPR-Cas9介导的拟南芥高效基因编辑系统的构建与应用》


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从T1代植株中挑选40株TCR1和19株TCR2,提取植株叶片DNA,对TCH4基因组片段进行PCR扩增,测序检测编辑结果。根据测序峰图手动解码编辑结果,结果发现,编辑类型可以分为4种:无编辑、纯合编辑、杂合编辑以及双等位编辑(图3)。在40株TCR1植株中,发生编辑的有32株,编辑效率达到80%,19株TCR2植株中,全部发生编辑,100%编辑效率。通过对不同的编辑类型进行统计,发现59株T1代阳性植株中,无编辑8株(13.56%)、纯合编辑9株(15.25%)、双等位编辑40株(67.80%)和杂合编辑2株(3.39%)(图4)。将每条染色体的编辑事件单独分析,118次编辑事件中,18次没有编辑,占比15.25%;45次单碱基插入,占比38.14%;1次多碱基插入,占比0.85%;11次单碱基缺失,占比9.32%;43次多碱基缺失,占比36.44%(表1)。其中多碱基缺失中,从几bp到几十bp均有发生,甚至几百bp缺失。在单碱基插入事件中,TCR1中只存在2种事件,4次A碱基插入和28次T碱基插入,而TCR2中4种碱基插入均有发生,5次A碱基插入,2次T碱基插入,1次C碱基插入和5次G碱基插入。