《表1 SDC2和BMP3引物序列》

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《粪便基因SDC2和BMP3甲基化联合检测在结直肠癌筛查中的价值》

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注：M：甲基化；U：非甲基化；F：正义链；R：反义链。SDC2：黏结蛋白聚糖2；BMP3：骨形态发生蛋白3

转化后的DNA作为模板DNA用于后续MSP技术检测。25μL PCR反应体系包括：TaKaRa EpiTaq HS（5 U/μL）0.125μL，10×EpiTaq PCR Buffer（Mg2+free）2.5μL，25 mmol/L MgCl22.5μL，dNTP Mixture3μL，正向引物1μL，反向引物1μL，模板DNA 2μL。反应条件为：95℃，5 min；95℃，30 s；54～62℃，30 s；72℃，30 s；40个循环；72℃，10 min。EpiTect PCR Control DNA作为阳性对照，水作为阴性对照。扩增产物在3%琼脂糖凝胶中进行电泳分离，然后进行凝胶成像。甲基化检测结果判定标准：仅出现甲基化条带而不出现非甲基化条带或甲基化和非甲基化条带均出现视为甲基化；仅出现非甲基化条带而不出现甲基化条带视为非甲基化。判定联合检测结果阳性的标准是只要有一个基因甲基化阳性即判定该样本为阳性。引物序列见表1。