《表1 基因编号和引物序列》

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《京尼平苷酸对ANIT诱导胆汁淤积大鼠的酮洛芬肝代谢和胆汁排泄的影响及机制探究》

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参照GenBank序列，确立CAR、PXR、Ugt1a1三种基因序列，目的基因及管家基因GAPDH引物，由宝生物工程（大连）有限公司设计合成，见表1。取-80℃冷冻下的肝组织约100 mg，液氮研磨至粉末，全部转移至1.5 mL塑料离心管中，加入1 mL裂解液，涡旋至无颗粒物，用TAKARA RNAsio提取肝脏中总RNA，使用NanoUV-3000微量核酸蛋白检测仪的OD 260/280值测定核酸的纯度。使用PrimeScriptTM RT Master Mix（Perfect Real Time）试剂盒的反应体系，进行RNA的逆转录反应，37℃保持15 min（反转录反应），85℃反应5 s（反转录酶的失活反应），4℃冷却后获得cDNA产物，-80℃保存备用。使用SYBR?Premix Ex TaqTM II（Tli RNaseH Plus）试剂盒，按照各试剂组分混合，加入目的基因引物制备PCR反应液，运用两步法PCR扩增标准程序。第一步:预变性，94℃30 s，一个循环；第二步:PCR反应，35个循环，94℃15 s，65℃30 s，进行cDNA扩增实验。荧光定量各基因表达值运用2-△△Ct法表示目的基因的相对表达量，使用Gapdh做对照计算。