《表1 基因名称和引物序列》

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《酪蛋白激酶2相互作用蛋白1对人牙周膜干细胞成骨分化能力的影响》

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首先，分别取各组成骨诱导培养21 d的细胞，经PBS洗涤并离心后，调整细胞密度为1×105个/mL，取1 mL，用Trizol裂解各组hPDLSCs，分离RNA，并利用其作为模板进行反转录成cDNA，其中反转录所得cDNA保存于-20℃冰箱中以防分解。按照Takara公司的qPCR试剂盒要求，加入上下游引物，利用qPCR仪进行反应，合成所设计的相关基因。对照基因选择为β-actin，用2-ΔΔCt法统计分析各组间成骨相关因子Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2，Runx2）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、骨钙素（osteocalcin，OCN）、核因子κB受体活化因子配体（receptor activator ofnuclear factor kappa-B li-gand，RANKL）和I型胶原（type I collagen，Coll I）的转录水平的差异，以及BMP信号通路相关因子BMP2、泛素连接酶1(Smad ubiquitination regulatoryfactor 1，Smurf1）和Smad家族成员4(mothers againstdecapentaplegic homolog 4，Smad4）水平差异。反应条件：95℃，10 s；95℃，5 s；60℃30 s，40个循环。引物序列见表1。