《表1 基因引物序列及产物长度》

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《体外构建人羊膜间充质干细胞膜片及成骨分化潜能》

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（1）实时荧光定量PCR检测成骨相关基因mRNA表达水平：随机选取培养状态良好的人羊膜间充质干细胞膜片和成骨诱导的人羊膜间充质干细胞膜片，用Trizol提取细胞RNA，紫外分光光度计检测RNA提取量，将反转录得到的c DNA模板进行荧光定量PCR检测。以GAPDH为内参，通过2-ΔΔCt法计算目标基因相对表达量。引物在NCBI基因库中进行比对，由上海生物工程股份有限公司合成，见表1。（2）Western blot检测成骨相关蛋白的表达：随机选取培养状态良好的人羊膜间充质干细胞膜片和成骨诱导的人羊膜间充质干细胞膜片，加入裂解液冰上裂解45 min，离心获取上清液，利用BCA蛋白定量法测定蛋白浓度，煮沸7 min，-80℃保存备用，避免反复冻融，应用10%的分离胶进行SDS-PAGE电泳，通过湿转法将蛋白转至PVDF膜上，封闭，加入骨钙蛋白、Ⅰ型胶原、Runt相关转录因子2抗体以及β-actin内参抗体，4℃反应过夜，加入二抗，显色成像，对目的条带的灰度值进行量化和分析。