《表1 PCV2 ORF2序列扩增及PCV2病毒鉴定引物》

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《高效价猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白多克隆抗体的制备及应用》

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参考文献报道[13]的PCV2 ORF2序列的核定位信号肽，设计引物（表1），以PCV2b毒株DNA为模板扩增不含NLS的ORF2基因片段，序列长度为585 bp，克隆至原核表达载体pET-30a上，测序正确后将重组质粒pET30aORF2(His标签）转化至大肠杆菌BL21(DE3）中。通过优化最佳诱导表达条件：37℃，220 r/min，0.5mmol/L IPTG诱导6 h，收集菌体，超声裂解菌体，4℃，13 500×g离心30 min，收集上清液，利用AKTA蛋白纯化系统和HisTrap柱（GE Healthcare）纯化Cap蛋白。