《表4 猪肉微生物菌群对蜡样芽孢杆菌检测的干扰》

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《蜡样芽孢杆菌特异性基因筛选及聚合酶链式反应检测方法的建立》

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食品样品中通常存在多种微生物，而非蜡样芽孢杆菌菌属的基因组DNA可能会影响PCR反应的准确度。因此，本研究对特异性引物的抗干扰能力进行了评价。将购自农贸市场的牛肉和猪肉样品经国标方法检测无蜡样芽孢杆菌污染后，进行增菌培养，牛肉的增菌浓度为5.28×107CFU/m L，猪肉的增菌浓度为7.75×106CFU/m L。将不同稀释度的蜡样芽孢杆菌培养液分别与牛肉和猪肉样品增菌液混合后提取总基因组DNA进行PCR检测，结果如表3和表4所示。由表3可知，当牛肉背景菌液浓度为5.28×107CFU/m L时，蜡样芽孢杆菌浓度高于3.74×104CFU/m L的样品可以扩增得到gene＿2625、gene＿2626和gene＿2627的条带。而当蜡样芽孢杆菌浓度为3.74×103CFU/m L时，仅可以扩增出gene＿2626的条带，其他2个基因无条带。说明此时样品中蜡样芽孢杆菌浓度较低，牛肉样品背景菌液浓度较高，对检测结果产生了干扰。由表4可知，当猪肉背景菌液浓度为7.75×106CFU/m L时，蜡样芽孢杆菌浓度高于3.74×103CFU/m L的样品可以扩增得到gene＿2625、gene＿2626和gene＿2627的条带。而当蜡样芽孢杆菌浓度低于3.74×103CFU/m L时，3个目的基因均无扩增条带产生。说明猪肉样品背景菌液浓度较高，对检测结果产生了干扰。本研究中在牛肉背景菌浓度5.28×107CFU/m L和猪肉背景菌浓度7.75×106CFU/m L的干扰下，当蜡样芽孢杆菌的浓度高于3.74×103CFU/m L，均可检测到目的条带。说明本研究中蜡样芽孢杆菌特异性引物具有较强的抗干扰能力。