《表1 蜡样芽孢杆菌的检测毒力基因引物》

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《糙米中蜡样芽孢杆菌的分离鉴定及其毒力基因与药敏性检测》

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采用田万帆等[14]的方法合成hbl A、hbl B、hbl C、hbl D、nhe A、nhe B、nhe C、ent FM、cyt K、bce T、ces和cer等关于蜡样芽孢杆菌12对毒力基因的引物。引物由杨凌天润奥科生物科技有限公司合成，引物信息见表1。PCR反应体系及条件如1.4.4.1所述，PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像系统检测。其中hbl B基因的PCR反应体系为：2×Mix取10μL；上游引物为0.4μL；下游引物为0.4μL；分离菌株BR1和BR4的DNA模板1μL，阳性对照组加入1μL标准菌株DNA模板，阴性对照组加入1μL双蒸水；最后以双蒸水补足20μL，进行PCR扩增。PCR扩增条件如下：95℃预变性5 min；95℃变性1 min，52℃退火30 s，72℃延伸1 min 30 s，共35个循环，72℃10 min。