《表1 蜡样芽胞杆菌8种毒力基因引物》

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《北京朝阳164株蜡样芽胞杆菌耐药性及腹泻毒力基因分析》

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BD凤凰100全自动细菌鉴定药敏仪对164株蜡样芽胞杆菌进行鉴定与药敏试验；GB 4789.14—2014《食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验》[4]进行15种手工生化分型；PCR扩增8种腹泻相关毒力基因见表1。PCR反应体系:Taq PCR Mastermix（预混Buffer，Taq酶，DNTP，Mg2+等）12.5μl，上游引物、下游引物各1μl，模板10μl，ddH2O 0.5μl，总体积25μl。PCR反应参数:hblA反应参数:95℃，10 min；95℃，1 min；57℃，1 min；72℃，2 min，35个循环；72℃，10 min；hblC、hblD反应参数:95℃，10 min；95℃，1 min；53℃，1 min；72℃，2 min，35个循环；72℃，10 min；nheA反应条件:94℃，1 min；94℃，30 s；53.9℃，30 s；72℃，40 s，40个循环；72℃，10 min；nheB、nheC、cytK反应参数:94℃，1 min；94℃，30 s；50.8℃，30 s；72℃，40 s，40个循环；72℃，10 min；bceT反应参数:95℃，5 min；95℃，1 min；58℃，1 min；72℃，1 min，30个循环；72℃，10 min。